【Uso previsto】

Il kit è una PCR fluorescente in tempo reale con sonda TaqMan per rilevare qualitativamente ORF1ab, acido nucleico dei geni N di 2019-nCoV nel tampone faringeo, espettorato in pazienti con sospetti sintomi di polmonite e casi di clustering.

I risultati dei test sono solo di riferimento clinico e non possono essere considerati solo come punto di riferimento per la diagnosi clinica. Si consiglia di effettuare analisi evidenti relative ai sintomi clinici e ad altri risultati di laboratorio.

Gli operatori devono avere esperienza di formazione professionale nell'amplificazione genetica o nell'analisi di metodi di biologia molecolare e possedere qualifiche pertinenti per le operazioni di laboratorio. Il laboratorio dovrebbe disporre di ragionevoli precauzioni di sicurezza biologica e procedure protettive.

【Principio del test 】

In questo kit, primer e sonde sono progettati rispettivamente per le regioni conservate e specifiche di ORF1ab, N di 2019-nCoV. La PCR fluorescente viene utilizzata per rilevare l'RNA virale dopo la purificazione dell'acido nucleico dell'RNA del campione.

Questo kit di test utilizza la tecnologia PCR fluorescente in tempo reale. Durante l'amplificazione della PCR, la sonda si lega al modello e il gruppo reporter all'estremità 5' della sonda viene scisso dall'enzima Taq (attività di esonucleasi 5'→3'), quindi allontanandosi dal gruppo di quench per generare un segnale fluorescente. La curva di amplificazione in tempo reale viene tracciata automaticamente in base al segnale di fluorescenza rilevato e viene calcolato il valore Ct del campione (il numero di cicli riscontrati quando il segnale di fluorescenza in ciascuna provetta di reazione raggiunge la soglia stabilita). I fluorofori FAM, VIC e Texas Red sono utilizzati per marcare le sonde del gene ORF1ab e del gene N nella soluzione di reazione. Utilizzando un test, è possibile eseguire simultaneamente il rilevamento qualitativo dei due geni sopra indicati di 2019-nCoV.

Per evitare risultati falsi negativi, il kit è dotato di un controllo interno (IC), contrassegnato con un gruppo fluorescente Cy5 che può essere utilizzato per monitorare la procedura di estrazione e la soluzione di reazione.

【Componenti principali 】

Nota ¹ : I diversi lotti di componenti non possono essere scambiati.

Nota ² : il kit del test non contiene reagente per l'estrazione dell'acido nucleico, preparare il reagente prima dell'uso.

1. Gestione del campione

Aggiungere 10μL di controllo interno rispettivamente a 200μL di controllo positivo e controllo negativo per eseguire l'estrazione dell'acido nucleico.

2. Preparazione dei reagenti:

Preparazione del sistema: prendere il liofilizzatore per l'amplificazione dell'acido nucleico preinstallato, quindi aprire la busta di alluminio e centrifugarlo immediatamente. La quantità di campione di ciascun test deve essere un multiplo di 8 contenente un controllo positivo e un controllo negativo. Aggiungere 35μL di acqua priva di nucleasi in ciascuna provetta di reazione.

3.Caricamento del campione:

Aggiungere 5μL di acido nucleico del campione da testare, controllo positivo, controllo negativo in modo che l'intero volume di reazione sia 40μL nella soluzione di reazione assegnata. Poiché non è necessaria una miscela fine, chiudere semplicemente il coperchio della provetta di reazione PCR, centrifugare il liquido nella parete della provetta sul fondo della provetta, quindi elaborare l'amplificazione PCR.

Dopo la verifica, si stima che l'aggiunta di 5μL-10μL di olio di paraffina nel sistema PCR non influirà sul risultato della PCR ma eviterà la contaminazione e la vaporizzazione del liquido.